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1944 Muller (j. Path. Bact. 1944,
56, 429-434) semble avoir été le premier à tester in vitro
l’action de différentes substances antiseptiques sur le bacille
de la tuberculose en utilisant la méthode de culture sur lame mise
au point par Pryce 1949 Bernard et Kreis reprendront le même principe, proposant d'utiliser un milieu nutritif (Dubos ou Youmans) contenant des concentrations connues de streptomycine (Rev. Tuber., 1949, 13, 124-128). Froyez (Sem. Hôp. Paris. 1949, 52, 1527-1529) puis Tinne (Lancet, 1950, 259, 901-904) proposent l'utilisation de la diffusion verticale sur milieu de Löwenstein afin d'étudier la résistance des souches à des concentrations connues de streptomycine. Coletsos et Boisvert décrivent une méthode d'appréciation rapide de la streptomycino-résistance par la primoculture des produits bacillifères ensemencés sur des milieux de Löwenstein imprégnés en surface avec des doses croissantes de streptomycine. Le premier tube sur lequel on ne détecte pas de croissance indique la sensibilité de la souche (Rev. Tuber., 1949, 13, 344-346). Gernez-Rieux publie une étude comparative
des procédés de recherche rapide de la streptomycino-résistance
du bacille de Koch in vitro et in vivo (Rev. Tuber.,1949,
13, 326-331). Cette étude fait apparaître que les différentes
techniques permettent de déceler les résistances élevées , mais
donnent suivant la méthode utilisée des résultats variables et souvent
difficilement interprétables pour des souches plus ou moins résistantes.
Ces divergences pouvant s'expliquer par l'utilisation de milieux
différents et par la présence au sein d'une souche de mutants résistants
en nombre variable avec des ensemencements mal mesurés. Il mettra
au point une méthode pour l'étude de la sensibilité à la streptomycine
de ces souches plus ou moins résistantes, permettant ainsi d'attirer
l'attention sur les souches de résistance partielle. Méthodes de mesure de la sensibilité utilisant le milieu liquide. Avantages : réponse rapide, évite le chauffage de l'antibacillaire en ajoutant directement celui ci au milieu liquide Dubos ou Youmans. Inconvénients : absence de numération des colonies. Le sérum sanguin qui entre dans la composition du Youmans inhibe certains antibacillaires; élevant la concentration minimale inhibitrice. Le tween du Dubos empêchant la formation d'amas bacillaires, produit l'effet inverse. Le gain de temps pour obtenir un résultat est minime car ces méthodes nécessitent une culture préalable sur un milieu solide. Méthodes de mesure de la sensibilité utilisant le milieu solide. Avantages : elles permettent de réaliser un test direct à partir du produit biologique après décontamination, à condition que celui ci contienne un nombre suffisant de bacilles à l'examen direct et un dénombrement des colonies, autorisant l'appréciation des résistances partielles. Inconvénients : pour la coagulation du milieu solide à l'œuf les antibiotiques doivent être soumis au chauffage et une certaine lenteur pour l'obtention du résultat à partir d'une primoculture. 1950 Benda et Urquia tentent de déterminer la proportion de germes sensibles et résistants avec une technique basée sur la coloration du bacille tuberculeux par la méthode de Fontes modifiée (Presse Médicale, 1950, 58, 234. et 1951, 59, 1671-1673). 1963 Des experts de l'organisation mondiale de la santé retiennent trois méthodes pouvant être utilisées pour tester la sensibilité ou la résistance d'une souche vis à vis d'un antibacillaire (Bull. World Health Org.,1963, 29, 565-578).
Les deux premières méthodes ne renseignent ni sur le nombre total de bacilles viables ensemencés, ni sur la proportion de bacilles résistants présents au sein de la souche à étudier. On sait qu'une souche résistante ne diffère d'une souche sensible que par le nombre particulièrement élevé de ses variants résistants. C'est pourquoi Canetti, Rist et Grosset mettront au point la méthode des proportions qui consiste à tester la sensibilité d'une souche avec deux dilutions bacillaires différentes de façon à :
Cette technique a permis d'éliminer
le facteur d'erreur lié aux variations d'inoculum. Elle est devenue
une méthode de référence, malgré quelques inconvénients : 1970 Brettey décrit une nouvelle méthode de mesure de la résistance en milieu liquide. C'est un procédé qui donne un résultat rapide en 7 jours (Acad. Nat. Med.,1970, 154, 95-100). 1977 Middlebrook propose la détection d'une culture mycobactérienne en milieu liquide (Middlebrook 7H12) contenant de l'acide palmitique marqué au C14, par mesure du 14CO2 libéré au cours du métabolisme (Am. Rev. Respir. Dis.,1977, 115, 1066-1069). L'appareil Bactec 460 (Becton Dickinson) réalise le dosage du 14CO2 en le traduisant sous forme numérique (index de croissance ou G I ), proportionnelle au nombre et au taux de croissance de la mycobactérie. Le Bactec 460 sera utilisé et très apprécié pour la réalisation rapide d'antibiogrammes ou la possibilité de tester les synergies entre antibiotiques (J. Clin. Microbiol., 1981, 12, 908-912 et 1985, 22, 919-923). Mais les contraintes d'utilisation dues à la manipulation et à l'élimination des déchets radioactifs augmentaient le coût de fonctionnement. (Revue du Praticien. Médecine Générale, 1991, tome 5, N°138). 1996 Premiers antibiogrammes avec les tubes MGIT (Mycobacteria Growth Indicator Tube; Becton Dickinson). Le milieu liquide MGIT ne contient aucune substance radioactive, mais un Middlebrook 7H9 et un indicateur fluorescent sensible aux variations d'oxygène. La consommation d'oxygène dans le milieu entraîne l'émission d'une fluorescence orangée mise en évidence par un transluminateur
à 365 nm (J. Clin. Microbiol., 1996, 34, 1565-1567). 1944 : la streptomycine (Waksman)
Les cinq antituberculeux dits majeurs
sont : La plupart des antibiotiques antituberculeux n'exercent aucune action sur les bactéries classiques, sauf la rifampicine, la streptomycine et la kanamycine.
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